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稻瘟茵胞外蛋白的提取及电泳方法初探

2015-04-13 14:55:30    益择发布
    利用蛋白质组学研究方法对稻瘟菌的胞外蛋白进行分析,可以更好地了解该病原菌的生物学特性和致病机制。蛋白质样品制备和双向电泳,都是蛋白质组学研究的基础。采用冷冻干燥,透析结合法与三氯乙酸一脱氧胆酸钠沉淀法(TCA—DOC沉淀法)提取液体培养稻瘟菌得到的胞外蛋白,利用17 em pH 3.0~10.0与17 cm pH 4.0~7.0两种pH梯度IPG胶条对同一样品进行第一向等电聚焦,12%SDS—PAGE凝胶进行第二向电泳,银染后用PDQuest软件(V7.4)对电泳图谱进行分析。结果表明,在上述两种提取稻瘟菌胞外蛋白的方法中,TCA—DOC沉淀法具有较好的提取效果,应用该实验方法得到的蛋白质分布在pH 4.0~7.0之间的点数达到621个,因此在双向电泳中,采用pH 4.0~7.0的胶条具有较好的分辨率。
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