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RNA抽取实验及注意事项

2019-01-16 15:49:10    益择发布
RNA抽取主要使用TRIzoI抽提法,TRIzoI主要用于裂解细胞,使细胞中的蛋白核酸物质得到释放。改进试剂盒抽屉方法,在样品加入裂解液后,通过高速离心总RNA在高离序盐状态下选着吸附于离心柱内硅基质膜上,通过一系列快速漂洗离心。去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的RNase-freeH20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
注意事项:
RNA不稳定、容易被降解或污染,因此在进行RNA实验时,要保持环境的清洁。RNA样品制备好应储存在-80℃,尽量避免反复冻融。使用RNA样品时、应在冰上操作。
预防RNase污染、注意以下几点
1.经常更换新手套,皮肤经常带有细菌、可能导致RNase污染。
2.使用无RNase的塑料制品避免交叉污染。
3.RNA在裂解液RL中时不时会被RNase降解。提取后继续处理过程中应该使用不含RNase的塑料盒玻璃器具。玻璃器具可在150℃烘烤4小时,塑料器具可在0.5M NaOH中浸泡10分钟,清水彻底洗净、灭菌可除去RNase。

4.配置溶液应使用RNase-Free ddH20(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至浓度0.1%(V/V)混匀放置过夜、高压灭菌。)

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